蛋白质纯化的注意事项
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- 发布时间：2022-06-13 10:26
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蛋白质纯化的分离纯化在生化研究和应用中有着广泛的应用，是一项重要的操作技术。一个典型真核细胞可以包含数千种不同的蛋白质，其中一些非常丰富，一些仅包含几个拷贝。为了研究一种蛋白质，我们必须首先从其他蛋白质和非蛋白质分子中纯化该蛋白质。
蛋白质纯化的注意事项
蛋白质纯化的分离纯化在生化研究和应用中有着广泛的应用，是一项重要的操作技术。一个典型真核细胞可以包含数千种不同的蛋白质，其中一些非常丰富，一些仅包含几个拷贝。为了研究一种蛋白质，我们必须首先从其他蛋白质和非蛋白质分子中纯化该蛋白质。
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蛋白质纯化的分离纯化在生化研究和应用中有着广泛的应用，是一项重要的操作技术。一个典型真核细胞可以包含数千种不同的蛋白质，其中一些非常丰富，一些仅包含几个拷贝。为了研究一种蛋白质，我们必须首先从其他蛋白质和非蛋白质分子中纯化该蛋白质。
蛋白质纯化要利用不同蛋白质之间固有的相似性和差异性，利用各种蛋白质之间的相似性去除非蛋白质物质的污染，利用蛋白质的差异性从其他蛋白质中提纯目标蛋白质。每种蛋白质的大小、形状、电荷、疏水性、溶解性、生物活性都会不同。利用这些差异，可以从混合物如大肠杆菌裂解物中提取蛋白质以获得重组蛋白质。
蛋白质纯化预防措施
进行任何一种蛋白质纯化时，都要时刻注意保持其稳定性，保护其活性。需要记住一些一般预防措施，包括:
1.操作尽可能置于冰上或者在冷库内进行。
2.不要太稀，蛋白浓度维持在μg/mL～mg/mL。
3.适当的pH，除非进行聚焦层析，否则所用缓冲溶液的pH应与pI相同，以防止蛋白质沉淀。
4.使用蛋白酶抑制剂防止蛋白酶降解目标蛋白;在细胞内纯化蛋白质时，加入DNA酶，降解DNA，防止DNA污染蛋白质。
5.避免反复冷冻和搅拌样品，以防止蛋白质变性。
6.缓冲溶液的组成尽可能模拟细胞内环境。
7.在缓冲溶液中加入0.1~1mmol/LDTT(二硫苏糖醇)(或β-巯基乙醇)以防止蛋白质氧化。
8.加入1~10mmol/LEDTA金属螯合剂，防止重金属对目的蛋白的损伤。
9.使用灭菌溶液防止微生物生长。
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